普魯士藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)

普魯士藍(lán)染色簡(jiǎn)介：

在酸性條件下，切片內(nèi)的高鐵鹽與亞鐵作用生成亞鐵氰化鐵（普魯士藍(lán)反應(yīng)）。

鐵反應(yīng)是用來鑒別組織或細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)的黃棕色色素是屬于哪一種色素，入黑色素、脂褐素、甲醛色素還是含鐵血黃素。

染色步驟（僅供參考）：

1、石蠟切片脫蠟至水；

2、蒸餾水洗兩次；

3、取等量2%亞鐵氫化鉀和2%鹽酸混合，染色30~45min；

4、蒸餾水洗，0.1%核固紅復(fù)染3min（染液用一段時(shí)間后調(diào)整為5min）；

5、無水乙醇脫水（兩缸各5分鐘）；

6、正丁醇30s；

7、二甲苯透明（兩缸各5min）， 中性樹膠封片（封片過程中保證組織上的二甲苯不能干，否則在高倍顯微鏡下觀察易出現(xiàn)小水珠結(jié)晶）。

染色結(jié)果：

含鐵血黃素呈藍(lán)色，胞核呈紅色。

注意事項(xiàng)：

1、組織應(yīng)采用緩沖中性甲醛液固定，若用一般的甲醛液，則應(yīng)作短時(shí)間固定后即包埋切片，經(jīng)甲醛液固定的組織反應(yīng)不良。

2、鹽酸以分析純較好，因粗制鹽酸內(nèi)含有較多的鐵，可導(dǎo)致假陽(yáng)性。

3、在操作過程中容器要干凈，避免使用鐵制工具（可用不繡鋼制工具）。

4、鐵反應(yīng)前的各步驟以蒸餾水沖洗，以防自來水內(nèi)的鐵離子與組織內(nèi)的鈣鹽結(jié)合產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。

5、制作對(duì)照片時(shí)，取另一張相同連續(xù)切片脫蠟至水，置入5%的草酸中作用2~6小時(shí)，即可將含鐵血黃素溶去，再染普魯士藍(lán)，鐵反應(yīng)陰性。

普魯士藍(lán)染色實(shí)驗(yàn)代測(cè)