人癌胚抗原（CEA）含量檢測原理

背景介紹：

癌胚抗原（CEA）描述了一組參與細胞粘附的高度相關(guān)的糖蛋白。它通常在胎兒發(fā)育過程中的胃腸組織中產(chǎn)生，但在出生前停止產(chǎn)生，所以CEA在健康成年人血液中的含量通常很低（約2-4納克/毫升）。然而，在某些類型的癌癥中血清水平會升高，這意味著它可以在臨床試驗中作為腫瘤標志物使用。重度吸煙者的血清水平也會升高。CEA是糖基磷脂酰肌醇（GPI）細胞表面錨定的糖蛋白，其專門的硅藻糖基化糖型可作為功能性結(jié)腸癌L-選擇素和E-選擇素配體，可能對結(jié)腸癌細胞的轉(zhuǎn)移擴散至關(guān)重要。從免疫學(xué)角度看，它們的特征是CD66分化簇的成員。這些蛋白包括CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e、CD66f。

檢測原理：

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人癌胚抗原（CEA）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人癌胚抗原（CEA）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

試劑盒組成

注：

1.  標準品濃度依次為：40、20、10、5、2.5、1.25 ng/mL

2.  經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  待測樣本孔先加待測樣本50μL，空白孔不加。樣本不足的情況下，上樣量最少10μL。操作方法：待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL。

4.  除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。